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          我可以用酒精做微生物樣品的保護劑嗎?

          作者:Michelle Tetreault Carlson 來源:美國MoBio實驗室【字號:

          歡迎回來!我們將繼續回來與大家一起分享一些新穎的不一樣的想法。分享一些客戶常問的技術問題,以及我們的回答?茖W家們提出了使用我們產品過程中遇到的問題,我們給與了回答,還有什么比這個更節省您的時間?

          這周我們我們討論:為什么用酒精作為防腐劑保存環境樣品不是個好主意?

          問:我們想用PowerSoil DNA Isolation Kit提取從物體表面采集的棉拭子DNA。

          對方法上是否有比較好的建議?通常我們會先潤濕滅菌面前,擦拭物體表面,然后把面前浸入到溶液中(可能是70%乙醇)。經過適當浸泡后,轉移一些溶液到PowerBead Tubes中,然后按照說明書進行提取。使用酒精會影響提取結果嗎?

          有沒有從物體表面(如門把等)上采集樣品建議操作方法嗎?

          非常感謝!

          雖然酒精能成功地保護龍舌蘭蟲的DNA,但對細菌并不合用。為什么呢?因為酒精常用于進行分子鑒定前對實驗操作臺進行消毒處理。我們用酒精滅菌。如果用酒精保存用于微生物組分析的棉拭子、土壤等其它樣品,你會獲得擦拭實驗操作臺同樣結果。酒精會殺死幾乎所有微生物。當細胞壁消失后,DNA會被釋放到上清液中,從可溶的雜質中分離DNA將非常困難。

          我們曾經嘗試分別從用100%、70%和50%酒精保存的土樣中提取DNA,結果是失敗的。用酒精保存的水樣濾膜也同樣失敗。沒有任何價值。

          對于棉拭子,最好的保存運輸條件是干燥。干燥的物體表面,只要刮取你要檢測的地方即可,不需要用到鹽水。而口腔棉拭子或濕的樣品,讓其在空氣中自然干燥,然后可在-20℃長期保存或運輸,室溫也可以。當拭子為干燥狀態,上面沾染到的細菌和真菌就停止生長。我們需要的不是消毒。

          因為DNA這種強壯的分子能在環境中保存相當長一段時間,所有我們通常建議土樣或水樣濾膜干燥、冷凍保存和運輸。土樣在不同溫度條件下長期保存過程中發生變化的相關數據正在收集當中。有了結果后我們會先大家公布。

          同時,我們建議準備使用RNA PowerSoil Kit提取RNA的土樣加入LifeGuard Soil Preservation Solution。加入LifeGuard后的土樣還應該盡快放入到冰箱,最好是-20℃,以獲得最原始的RNA當然剪影。這是因為RNA表達隨著環境的變化發生突然改變。當樣品放入到溶液中,微生物的生長繁殖就停止了。

          對基于DNA的微生物組學研究,因為基因組當然不會馬上發生改變,原始狀態保存土壤不加任何額外液體是最簡單、最少干擾和最省錢的辦法。

          讓你的微生物樣品遠離酒精吧。如果你要研究龍舌蘭蝴蝶幼蟲,它是一種很好的防腐劑。是有效放腐,不是消化。如果你想知道門把手或土壤中有哪些微生物,就讓它們保持在原始的生長基質中,或干燥的濾紙或棉拭子。它們跟DNA一起保持靜止、完整。

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