如何在酶解DNA時保護好你的RNA

核酸提取過程中DNA酶解步驟是引起RNA降解或丟失的最常見原因之一。酶解反應一般在硅膠離心柱上進行，這對離心柱式核酸提取來說是一種節省時間的好方法，但對富含DNA的樣品而言就不那么有效率了（比如脾臟，胸腺，甚至某些土壤樣品），這種情況下，需要在溶液中對DNA進行酶解。

經典的DNA酶解程序最后一步涉及加EDTA或者加熱滅活酶，這兩種方式都會影響RT-PCR結果：EDTA會抑制RT-PCR酶的活性，加熱會導致RNA完整性受損。另外，大部分DNA酶需要冷凍保存并且多管分裝以避免多次凍融降低酶活性。

我們推出了一套能全程保護RNA的酶解體系：DNase Max

DNase Max：是一種可在室溫下穩定保存的高活性（1ul酶能在20分鐘內消化30ugDNA）DNA酶溶液。最強大的部分是清除DNA酶這一步。DNA酶和陽離子被一種強特異性的樹脂吸附而從RNA樣品中清除，無需添加酶抑制劑或者加熱，終產物可直接用于qRT-PCR。與競爭性試劑盒比較，該樹脂非常高效，單次反應能完全去除10個單位DNA酶（如下圖，3-4泳道），而競爭試劑盒僅能去除2單位DNA酶（如下圖，1-2泳道）。

這意味著幾個小時的工作過程中你都能很好的保護你的珍貴RNA，最終得到更準確的基因表達分析結果。

DNase Max去除樹脂完全去除DNA酶

RNA樣品分別由DNase Max™ 試劑盒和競爭對手的試劑盒進行DNA消化以及DNase去除。操作嚴格按照官方說明書進行。通過MO BIO 的DNase-free認證辦法，對DNase殘留活性進行分析。條帶5為陰性對照，不使用DNase。所有樣品37℃孵育1h，65℃ 5min滅活。1%瓊脂凝膠電泳展示如圖，DNase Max去除樹脂成功地去除掉所有DNase（條帶3-4），而競爭對手產品的樹脂并不能完全去除樣品中的所有DNase（條帶1-2）。

保護RNA的其他產品

無論什么來源的樣品，RNA的提取從來都是不容易的，尤其是樣品有限或者不可替代的時候。因為RNA不穩定，所以操作小心快速很關鍵。有很多方法可以在操作中保護起到RNA的作用，使你操作起來更加輕松而不必焦慮。

用BME、均勻快速地研磨和使用帶清除樹脂并且經認證不含RNA酶的DNA酶將成為你成功提取任意樣品RNA的小技巧。此外，要去除工作臺和設備上的核酸酶，應用實驗室清潔噴霧（12095）十分有效，經認證不含RNA酶的手套（1556）的使用也能提供極大的幫助，在我們的實驗室，這些都是必不可少的。